学习中心
手机学习 
借助载体上的遗传标志进行筛选
北京张博士医考张银合博士携全体优秀老师助大家考试顺利通过！
（1 ）利用抗生素抗性标志筛选：将含有某种抗生素抗性基因的载体转化宿
主细胞后，将细胞在含有相应抗生素的培养基中培养，无载体转入的细胞将被杀
死，生长的细胞即是含有载体的细胞。至于细胞中的载体是否为含有目的DNA 的
重组载体，尚需进一步鉴定。
（2 ）利用基因的插入失活／插入表达特性筛选：针对某些带有抗生素抗性
基因的载体，当外源DNA 插入某一抗性基因后，便可使该抗性基因失活。借助该
抗性标志及载体上的其他标志，便可筛选出带有重组载体的克隆。例如pBR322质
粒含有ampR和四环素抗性（tetR）两个抗性基因，如将外源DNA 插入tetR基因序
列中，便可使tetR失活，经相应重组载体转化的细菌只能在含有氨苄青霉素的培
养基上生长，而不能在含有四环素的培养基上生长（图21-10 ）。
利用基因的插入表达也可筛选带有重组载体的克隆。例如，质粒pTR262携带
来自λ噬菌体的CI基因，该基因在正常情况下表达产生阻遏蛋白，从而使tetR基
因不能表达。当在CI基因中插入外源DNA 后，将导致CI基因失活，从而使tetR基
因去阻遏而表达。如果细菌内含有插入表达的重组体，则可在含有四环素的培养
基上生长。
（3 ）利用标志补救筛选：标志补救（marker rescue ）是指当载体上的标
志基因在宿主细胞中表达时，通过互补宿主细胞的相应缺陷而使细胞在相应选择
培养基中存活。利用该策略可初步筛选带有载体的重组子。例如，S.cerevisiae
酵母菌株因trp1基因突变而不能在缺少色氨酸的培养基上生长；当转入带有功能
性trp1基因的载体后，转化子则能在色氨酸缺陷的培养基上生长。标志补救也可
用于外源基因导入哺乳类细胞后的阳性克隆的初筛。例如，当把带有二氢叶酸还
原酶（dhfr）基因的真核表达载体导入dhfr缺陷的哺乳类细胞后，则可使细胞在
无胸腺嘧啶的培养基中存活。从而筛选出带有载体的克隆（DHFR可催化二氢叶酸
还原成四氢叶酸，后者可用于合成胸腺嘧啶）。要确定是否为带有重组载体的阳
性克隆，还需进一步鉴定。
利用α互补筛选携带重组质粒的细菌也是一种标志补救选择方法。关于α互
补原理在本节“重组DNA 技术中常用的载体”部分已有介绍，这里仅以图21-11
概括说明将外源基因插入载体lacZ基因N 端序列时是如何进行筛选的。
（4 ）利用噬菌体的包装特性进行筛选：λ噬菌体的一个重要遗传特性就是
其在包装时对λDNA 大小有严格要求。只有重组λDNA 的长度达到其野生型长度
的75% ～105%时，方能包装形成有活性的噬菌体颗粒，进而在培养基上生长时呈
现清晰的噬斑；而不含外源DNA 的单一噬菌体载体DNA 因其长度太小而不能被包
装成有活性的噬菌体颗粒，故不能感染细菌形成噬斑。根据此原理，可初步筛选
出带有重组λ噬菌体载体的克隆。
「张博士医考www.guojiayikao.com 整理，如有转载，请注明出处」
上一篇：克隆载体应具备的基本特点
下一篇：尿频、尿急与尿痛的伴随症状
- 免费试听
- 网络课
- 直播课
配套图书
红宝书/张博士医考红宝书系列2023新版
