学习中心
手机学习 
临床执业医师辅导之—尖锐湿疣的化验检查
北京张博士医考临床执业医师辅导之—尖锐湿疣的化验检查
北京张博士医考张银合博士携全体优秀老师助大家考试顺利通过！
一、醋酸白试验
用3-5%醋酸外涂疣体2-5 分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15
分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV 感染细胞产生的角蛋白
与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检
测HPV 的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或
外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC
提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。
二、免疫组织学检查
常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP ），显示湿疣内的病毒蛋白，以
证明疣损害中有病毒抗原。HPV 蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现
淡红色的弱阳性反应。
三、组织化学检查
取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损
中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP ）方法中，
核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。
四、病理检查
主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增
生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。
但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细
胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深
嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein
巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，
故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。
五、基因诊断
迄今，HPV 难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是
核酸杂交。近年来发展的PCR 方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV
检测开辟了新途径。
（一）标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取
分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml 含有0.05% 硫柳汞的PBS
中，用PBS 离心（3000g ，10min ）洗涤2 次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml
细胞悬液抽提DNA.
2.标本核酸的提取：按1 体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/L
Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA ，150mmol/L NaCl，0.4%SDS ，1.0mg/ml
蛋白酶K ）37℃下处理过夜；且等体积酚/ 氯仿（1 ：1 ），氯仿/ 异戊醇（24
：1 ）各抽提2 次；加1/10体积3mol/L NaAc（pH 5.2）及2.5 倍体积无水乙醇
置-20 ℃ 2h 或过夜沉淀DNA ；加1 体积乙醇洗涤1 次；用60μl 含RNA 酶（100
μg/ml）的TE液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA）溶解DNA ，
37℃温育30min.
（二）PCR 扩增
1.引物设计和合成：HPV 基因组可分为早期区（E ）和晚期区（L ），每区
含一系列开放读码框架（ORF ）。序列分析表明，各型HPV 的非编码区及E1、E6、
E7和L1区均有保守序列。Manos 等从HPVL1 区中选择保守序列设计合成引物MY11
和MY09见表1 ，该引物与HPV 6 、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它
型HPV.
Manos 等设计的HPVL1 通用引物
MY11：GCMCAGGGWCATAAYAATGG
MY09：CGTCCMARRGGAWACTGATC
2.PCR 反应试剂：Taq DNA 聚合酶（2U/ml ）、10mmol/L dNTP 贮备液（dATP、
dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR 缓冲液（500mmol KCl 、40mmol/L MgCl2、
100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5），100 μmol/L MY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃
蒸馏器制备的蒸馏水。
3.PCR 扩增方法和程序：以100 μl PCR 反应液' 用无菌0.5ml 硅化塑料离
心管为反应管进行扩增反应。
（1 ）实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA 外的
其它各种PCR 反应试剂。
（2 ）各反应管依次加入10μl 标本和90μl 预混反应试剂。
（3 ）加入80-100μl 石蜡油，在台式离心机上快速离心数秒钟，使各反应
试剂收集于油层下。目前，PCR 试剂已商品化，反应体积为25μl.使用时只加入
标本DNA 即可。
（4 ）将反应管置PCR 扩增仪上，循环参数为95℃ 30s，55℃ 40s，72℃ 50s
循环35次，最后72℃延伸5min.
4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV 的重组质粒（每反应为100pg ）
或含有HPV 的细胞系（如Caski 、HeLa）DNA 为阳性对照，以无HPV 的人细胞系
DNA 为阴性对照。
（三）扩增产物的检测和分析
1.凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl 扩增产
物用5%-7% 聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分
析结果，分子量约为450bp 处出现明显的DNA 带。
2.核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA 或需确定DNA 带的特异性时，可用
标记的公用混合探针和（或）型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。
按照标准方法制32P ATP 标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol 特异
活性。杂交液中需含有2 ×106-5 ×106cpm探针/ml.在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，
随后于30-55 ℃下用洗涤液（2 ×SSC 、0.1%SDS ）迅速冲洗杂交膜，除去多余
探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min
；MY12、MY13及MY16探针，56-57 ℃下10 min，并换液重洗1 次；MY14及WD74探
针，58-59 ℃下10min ，亦换液重洗1 次。
用PCR 方法检测HPV 比核酸杂交方法优越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝胶
电泳直接分析结果，可检出标本中200 个拷贝的HPV DNA ，若以核酸杂交检测PCR
产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的HPV DNA.
鉴于PCR 技术的高度敏感性，以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求，
避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下，PCR 扩增产物经凝胶电泳，
观察产生的DNA 可直接作出诊断。因此，PCR 技术检测HPV 实验周期短、简便快
速。
「张博士医考www.guojiayikao.cn整理，如有转载，请注明出处」
- 免费试听
- 网络课
- 直播课
配套图书
红宝书/张博士医考红宝书系列2023新版
