无菌操作规则包括：
1．手术人员穿无菌手术衣和戴无菌手套之后，手不能接触背部、腰部以下和肩部以上部位，这些区域属于有菌地带；同样，也不要接触手术台边缘以下的布单。
2．不可在手术人员的背后传递手术器械及用品。坠落到无菌巾或手术台边以外的器械物品，不准拾回再用。
3．手术中如无菌巾、布单等物已被湿透，其无菌隔离作用不再完整，应加盖干的无菌布单。
4．在手术过程中，同侧手术人员如需调换位置，一人应先退后一步，背对背地转身到达另一位置，以防触及对方背部不洁区。
5．手术开始前要清点器械、敷料，手术结束时，检查胸、腹等体腔，待核对器械、敷料数无误后，才能关闭切口。
6．切口边缘应以无菌大纱布垫或手术巾遮盖，并用巾钳或缝线固定，仅显露手术切口。术前手术区粘贴无菌塑料薄膜可达到相同目的。
7．作皮肤切口以及缝合皮肤之前，需用70%精再涂擦消毒皮肤一次。
8．切开空腔脏器前，要先用纱布垫保护周围组织，以防止或减少污染。