2019年执业药师:杂质的去除方法
酶提取液中常含有杂蛋白、多糖、脂类及核酸等杂质,可用下述方法去除:
调PH和加热法:利用蛋白质对酸、碱和热变性方面性质的差异,可去除非活性杂蛋白张|博士医考整理。 张博士|医考整理。如制备脂肪酶时,在pH3、4时以400C温度加热150min,淀粉酶活力可丧失90%而被除去,而脂肪酶活力仍保持80%以上
蛋白质表面变性法:蛋白质表面变性后其性质有所不同,借以去除杂蛋白张博士医|考整理。 张博士医考整 理。如制备过氧化氢酶时,加入氯仿和乙醇进行振荡可以将杂蛋白变性而去除
蛋白质沉淀剂法:利用醋酸铝、利凡诺、单宁酸、离子型表面活性剂等蛋白质沉淀剂可以去除杂蛋白及粘多糖类杂质. .使用时要注意这类试剂常可引起酶变性失活,因此应迅速除去
选择性变性法:各种蛋白质对变性剂的稳定性不同,可以用选择性变性剂去除杂蛋白. 张博士|医考搜集整理。如细胞色素丙对三氯醋酸较稳定,所以在制备时可用2.5%三氯醋酸使其他杂蛋白变性使沉淀除去
加保护剂热变性法:酶与底物或竞争性抑制剂结合后,其稳定性常显著增加张博|士医考搜集整理。 张博士医考|搜集整理。所以常用它们为保护剂,再用一些剧烈手段破坏杂蛋白,如用D-甲基苯甲酸为D-氨基酸氧化酶的保护剂,经加热除去杂蛋白,使该酶得到很好的提纯
核酸沉淀剂法:酶液中的核酸类杂质,可以用氯化锰、鱼精蛋白硫酸盐等沉淀剂使其沉淀而除去. 张博士|医考|搜集整理。必要时,也可用核糖核酶将核酸降解后除去
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