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执业药师考试大纲——测定蛋白质分子量的方法
北京张博士医考执业药师考试大纲——测定蛋白质分子量的方法
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1.凝胶过滤法凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由
于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围，在此范围内，分子
量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此，用几种已知分子量的蛋白质为标准，
进行凝胶层析，以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图，绘制出标
准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析，根据其所用的洗脱体积，
从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量。
2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取
决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带电荷的多少。SDS （十二烷基磺酸钠）
是一种去污剂，可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入SDS 后，SDS
与蛋白质分子结合，使蛋白质分子带上大量的强负电荷，并且使蛋白质分子的形
状都变成短棒状，从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形状的差异。
这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小，蛋白质分子在电泳中的相对迁移
率和分子质量的对数成直线关系。以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率
作图，得到标准曲线，根据所测样品的相对迁移率，从标准曲线上便可查出其分
子质量。张博士医考论坛bbs.guojiayikao.com 3.沉降法（超速离心法）沉降系
数（S ）是指单位离心场强度溶质的沉降速度。S 也常用于近似地描述生物大分
子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，
沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比，应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的
沉降行为，可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系数，将S 带
入公式，即可计算出蛋白质的分子质量。质的沉降速度。S 也常用于近似地描述
生物大分子的大小。蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子
趋于下沉，沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比，应用光学方法观察离心过程中蛋
白质颗粒的沉降行为，可判断出蛋白质的沉降速度。根据沉降速度可求出沉降系
数，将S 带入公式，即可计算出蛋白质的分子质量。
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