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荧光分析法一、基本原理
荧光的产生:此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态,当其从激发态再回复到基态时,过剩的能量可以电磁辐射的形式放射 (即发光). .荧光发射的特点是:可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能,发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失
发射荧光的光量子数亦即荧光强度,除受激发光强度影响外,也与激发光的波长有关. 张博士医考整|搜集理。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱(荧光光谱),即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰 选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰
物质的激发光谱和荧光发射光谱,可以用作该物质的定性分析. 张博士医|考整理。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度 与溶液中该物质的浓度成正比关系,可以用作定量分析北京张博士医考搜集整理 荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高,浓度太大的溶液会有 “自熄灭”作用,故荧光分析法应在低浓度溶液中进行张博士医考整 理。 张博士医考|搜集整理。
二、荧光分光光度计
激发光源→激发光单色器→样品池
↓
发射光单色器→检测器→数据记录处理
样品池用低荧光材料制成,四面透光,发射光方向与激发光成直角
三、应用
荧光分析可用于鉴别和含量测定. .一般采用对照品比较法测定含量,灵敏度高、选择性好,但干扰多、线性范围窄,多用于需要高灵敏度和允许较大变异性的样品分析
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