除去杂抗体的两种方法
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除去杂抗体的两种方法:1.亲和层析法
将交叉杂抗原交联到琼脂糖珠4B上北京张博士医考|搜集整理,如除去抗白蛋白抗体,则交联上白蛋白或不含甲胎蛋白的血清,装柱后,将预吸收的抗体通过亲和层析柱,杂抗体吸附在柱上,流出液则是单价特异性抗体张博士医考|搜集整理。 张博|士医考整理。
2.吸附剂方法
用不含特异性抗原的抗原液,即不含用于免疫动物抗原的其他杂抗原液,如血清、组织液或已知的某种杂抗原,用双功能试剂将其交联,做成固相吸附剂 如用不含甲胎蛋白的血清,稀释1倍后,加入0.25%的戊二醛或丙酮醛,放冰箱一夜后,该血清成为胶冻状,用力打碎(或用组织粉碎器),用缓冲液多次洗涤后,则成为颗粒状的凝胶吸附剂. 张博士|医考整理。用这种吸附剂直接加到抗血清中(约1/10),抗原则与杂抗体结合,上清液则为无杂抗体的单价特异性抗体 有时因杂抗体太多,必须处理吸收两次才能完全去除. .吸附过的凝胶,用3mol/L硫氰酸钾(或钠)洗涤,洗脱掉杂抗体,可再继续使用
有时杂抗原较少,其他蛋白也少,加入戊二醛后不形成胶冻状,此时可加入无关蛋白进行交联,如牛血清蛋白、兔血清、马血清、卵白蛋白等张博士|医考搜集整理。 .加入量以达到含总蛋白的2%~3%为宜
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