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血红蛋白含量的测定是在被稀释的血液中加入溶血剂后，使红细胞释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在530：550nm）下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成比例，仪器便可显示Hb浓度。

不同系列的血液分析仪配套溶血剂配方不同，形成的血红蛋白衍生物也不同，但大多数的最大吸收光 谱接近540nm.因为国际ICSH推荐的氰化高铁（HiCN）法，其最大吸收峰在540nm，仪器的校准必须以HiCN值为准。近年来许多高档的分析仪 上采用了激光散射法进行单个血红细胞血红蛋白的分析，以尽量减少高WBC、乳糜血、高胆红素等对HBG比色的影响。

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