抗血清的纯化技术
北京张博士医考检验资格考试辅导之——抗血清的纯化技术
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纯化的目的是尽量去除抗血清中与目的抗体不相关的成分,防止与特定抗原反应时起干扰作用。最常见的纯化方式是提取特异性IgG或单价特异性抗血清。
一、特异性IgG抗血清制备
首先用硫酸铵或硫酸钠盐析法粗提丙种球蛋白,再进一步纯化,常用的方法有:
1.离子交换层析法:离子交换剂有DEAE纤维素和QAE纤维素。
2.凝胶过滤:通过多孔凝胶介质达到分离目的。
3.亲和层析法:采用纯化抗原或粗提抗原交联的sepharose 4B的层析柱来制备。
4.酶解法:片段用胃蛋白酶水解制备。
二、单价特异性抗血清制备
主要通过亲和层析法(交叉杂抗原与琼脂糖珠4B交联制成层析柱)和吸附法(用双功能试剂与抗原交联,制成固相吸附剂)除去杂抗体。
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