北京张博士医考张银合博士携全体优秀老师助大家考试顺利通过！

放射免疫分析测定方法：

用放射免疫分析进行测定时分三个步骤，即抗原抗体的竞争抑制反应、B和F的分离及放射性的测量。

（一）抗原抗体反应

将抗原（标准品和受检标本）、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定的温度下进行反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。不同质量的抗体 和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。如受检标本抗原含量较高，抗血清的亲和常数较大，可选择较高的温度（15～37℃）进行较短时间的温 育，反之应在低温（4℃）作较长时间的温育，形成的抗原抗体复合物较为牢固。

（二）B、F分离技术

在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物（B）不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原（F）的分离。另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。

1.第二抗体沉淀法这是RIA中最常用的一种沉淀方法。将产生特异性抗体（第一抗体）的动物（例如兔）的IgG免疫另一种动物（例如羊），制得羊抗 兔IgG血清（第二抗体）。由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原-第一抗体- 第二抗体组成的双抗体复合物。但因第一抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使之与 第二抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。经离心即可使含有结合态抗原（B）的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原（F）分离。

将第二抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第二抗体。利用固相第二抗体分离B、F，操作简便、快速。

2.聚乙二醇（PEG）沉淀法最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG溶液代替第二抗体作沉淀剂。PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。缺点是非常特异性结合率比用第二抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。

3.PR试剂法是一种将双抗体与PEG二法相结合的方法。此法保持了两者的优点，节省了两者的用量，而且分离快速、简便。

4.活性炭吸附法小分子游离抗原或半抗原被活性炭吸附，大分子复合物留在溶液中。如在活性炭表面涂上一层葡聚糖，使它表面具有一定孔径的网眼，效果 更好。在抗原与特异性抗体反应后，加入葡聚糖-活性炭。放置5～10min，使游离抗原吸附在活性炭颗粒上，离心使颗粒沉淀，上清液中含有结合的标记抗 原。此法适用于测定类固醇激素，强心糖苷和各种药物，因为它们是相对非极性的，又比抗原抗体复合物小，易被活性炭吸附北京张博士医考搜集整理。

（三）放射性强度的测定

B、F分离后，即可进行放射性强度测定。测量仪器有两类，液体闪烁计数仪（β射线，如3H、32P、14C等）和晶体闪烁计数仪（β射线，如125、131I、57Cr等）。

计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm（计数/分），也可用cps（计数/秒）表示。如果知道这个测量系统的效率，还可算出放射源的强度，即dpm（衰变/分）或dps（衰变/秒）。

每次测定均需作标准曲线图，以标准抗原的不同浓度为横坐标，以在测定中得到的相应放射性强度为纵坐标作图（图16-3）。放射性强度可任选B或F， 亦可用计算值B/（B+F）、B/F和B/B0.标本应作双份测定，取其平均值，在制作的标准曲线图上查出相应的受检抗原浓度。

「张博士医考www.guojiayikao.com整理，如有转载，请注明出处」